①凱氏定氮法
原理：蛋白質(zhì)平均含氮量為16%。當(dāng)樣品與濃硫酸共熱，蛋白氮轉(zhuǎn)化為銨鹽，在強(qiáng)堿性條件下將氨蒸出，用加有指示劑的硼酸吸收，最后用標(biāo)準(zhǔn)酸滴定硼酸，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)酸的用量即可求出蛋白質(zhì)中的含氮量和蛋白質(zhì)含量。
②雙縮脲法
原理：尿素在180℃下脫氨生成雙縮脲，在堿性溶液中雙縮脲可與Cu2+形成穩(wěn)定的紫紅色絡(luò)合物。蛋白質(zhì)中的肽鍵實(shí)際上就是酰胺鍵，故多肽、蛋白質(zhì)等都有雙縮脲（biuret）反應(yīng)，產(chǎn)生藍(lán)色或紫色復(fù)合物。比色定蛋白質(zhì)含量。
缺點(diǎn)：靈敏度低，樣品必須可溶，在大量糖類(lèi)共存和含有脯氨酸的肽中顯色不好。其 精確度 較差 (數(shù)mg)，且會(huì)受樣品中 硫酸銨 及 Tris 的干擾，但 準(zhǔn)確度 較高，不受蛋白質(zhì)的種類(lèi)影響。
?、跢olin酚法(Lowry)
Folin酚法是biuret 法的延伸，所用試劑由試劑甲和乙兩部分組成。試劑甲相當(dāng)于雙縮脲試劑（堿性銅試劑），試劑乙中含有磷鉬酸和磷鎢酸。
在堿性條件下，蛋白質(zhì)中的巰基和酚基等可將Cu2+還原成Cu+， Cu+能定量地與Folin－酚試劑反應(yīng)生成藍(lán)色物質(zhì)，600nm比色測(cè)定蛋白質(zhì)含量。
靈敏度較高(約 0.1 mg)，但較麻煩，也會(huì)受 硫酸銨 及 硫醇化合物 的干擾。 步驟中各項(xiàng)試劑的混合，要特別注意均勻澈底，否則會(huì)有大誤差。
?、茏贤夥?/span>
280nm光吸收法：利用Tyr在280nm在吸收進(jìn)行測(cè)定。
280nm-260nm的吸收差法：若樣品液中有少量核酸共存按下式計(jì)算：
蛋白質(zhì)濃度(mg/ml)=1.24E280-0.74E260 （280 260為角標(biāo)）
⑤色素結(jié)合法（Bradford 法）
直接測(cè)定法：利用蛋白質(zhì)與色素分子（Coomassie Brilliant Blue G-250）結(jié)合物的光吸收用分光光度法進(jìn)行測(cè)定。
考馬斯亮蘭（CBG）染色法測(cè)定蛋白質(zhì)含量。CBG 有點(diǎn)像指示劑，會(huì)在不同的酸堿度下變色；在酸性下是茶色，在中性下為藍(lán)色。當(dāng) CBG接到蛋白質(zhì)上去的時(shí)候，因?yàn)榈鞍踪|(zhì)會(huì)提供 CBG一個(gè)較為中性的環(huán)境，因此會(huì)變成藍(lán)色。當(dāng)樣本中的蛋白質(zhì)越多，吸到蛋白質(zhì)上的CBG也多，藍(lán)色也會(huì)增強(qiáng)。因此，藍(lán)色的呈色強(qiáng)度，是與樣本中的蛋白質(zhì)量成正比。
間接測(cè)定法：蛋白質(zhì)與某些酸性或堿性色素分子結(jié)合形成不溶性的鹽沉淀。用分光光度計(jì)測(cè)定未結(jié)合的色素，以每克樣品結(jié)合色素的量來(lái)表示蛋白質(zhì)含量的多少。
⑥BCA法
BCA（Bicinchoninc acid procedure，4,4’-二羧-2,2’-二喹啉）法與Lowry法相似，主要差別在堿性溶液中，蛋白質(zhì)使Cu2+轉(zhuǎn)變Cu+后，進(jìn)一步以BCA 取代Folin試劑與Cu+結(jié)合產(chǎn)生深紫色，在波長(zhǎng)562 nm有強(qiáng)的吸收。
它的優(yōu)點(diǎn)在于堿性溶液中BCA 比Folin試劑穩(wěn)定，因此BCA與堿性銅離子溶液結(jié)合的呈色反應(yīng)只需一步驟即完成。靈敏度Lowry法相似。
本方法對(duì)于陰離子、非離子性及二性離子的清潔劑和尿素較具容忍度，較不受干擾，但會(huì)受還原糖 及EDTA的干擾。
⑦膠體金測(cè)定法
膠體金(colloidal gold)是氯金酸(chloroauric acid)的水溶膠，呈洋紅色，具有高電子密度，并能與多種生物大分子結(jié)合。
膠體金是一種帶負(fù)電荷的疏水膠體遇蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)變?yōu)樗{(lán)色，顏色的改變與蛋白質(zhì)有定量關(guān)系，可用于蛋白質(zhì)的定量測(cè)定。
⑧其他方法
有些蛋白質(zhì)含有特殊的 非蛋白質(zhì)基團(tuán)，如 過(guò)氧化物酶含有 亞鐵血紅素基團(tuán)，可測(cè) 403 nm 波長(zhǎng)的吸光來(lái)定量之。 含特殊金屬的酶 (如鎘)，則可追蹤該金屬。
魯公網(wǎng)安備 37010102001382號(hào)
